Energy Efficiency in Bioreactor Scale-Up Processes
Scaling up bioreactors for cultivated meat production - from small (1–5 L) to large (1,000+ L) systems - brings energy challenges. Larger volumes require more power for mixing, oxygen transfer,...
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Defined Bioscience | SKU:
<tc>Defined Bioscience</tc> Ready-CEPT®細胞生存率向上剤
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サポート
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Defined Bioscience は、トラブルシューティング、プロセスの最適化、プロトコルのガイダンスを含む直接的なアフターサポートを提供します。バッチ固有のドキュメントはリクエストに応じて提供可能です。
国立衛生研究所で最初に特定されたCEPT技術から開発されたReady-CEPTは、従来のROCK阻害剤のみのシステムと比較して、遺伝的に安定した幹細胞培養、単一細胞クローニング、およびオルガノイド形成をサポートすることが示されています。これは、哺乳類および多能性細胞株全体で普遍的な細胞保護添加剤として機能し、細胞死を減少させ、一貫したコロニー形成を促進します。
このサプリメントは、動物由来成分を使用せず、DMSO/水中で無菌の1000×液体として供給され、HiDef® B8のような化学的に定義された血清不使用の培地と互換性があります。各10 µLまたは200 µLのバイアルで、それぞれ10 mLまたは200 mLのCEPT補充培地を調製します。-20 °Cで保存し、光から保護された状態で、Ready-CEPTは最大12か月間安定しています。
研究開発用のみ。人間または診断用途には使用できません。
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Mix immediately after thawはい
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<p>pHと温度管理：細胞成長への影響</p>
哺乳類細胞を育てるためには、pHと温度を正確に維持することが特に培養肉の生産において重要です。細胞は増殖（増殖）し、筋繊維に発達（分化）するために制御された環境を必要とします。ここでの重要なポイントは次のとおりです: 最適条件: pHは7.2–7.4の間に保ち、温度は37°Cにする必要があります。わずかな偏差（e.g., pHが0.3単位下がるなど）でも成長が遅くなり、生産性が低下します。 なぜ重要か: 細胞は不均衡を修正するために余分なエネルギーを消費し、それが成長効率に影響を与えます。高密度培養は特に乳酸の蓄積によるpH低下に陥りやすいです。 スケールでの課題: 大型バイオリアクターはpHの急上昇やCO₂の蓄積など不均一な条件に直面し、正確な制御が難しくなります。 ソリューション: 高度なバイオリアクターは、自動化システムと信頼性の高いセンサーを備えており、安定性を維持し、細胞の成長と一貫性を向上させます。 ラボで細胞を育てる場合でも、生産のためにスケールアップする場合でも、pHと温度を安定させることは成功のために不可欠です。 バイオリアクター内のセンサー pHと温度が細胞成長に与える影響 バイオリアクター設計におけるpHと温度の役割は、理論的な重要性を超えて、細胞の代謝と成長に直接影響を与えます。このセクションでは、これら2つの要因が細胞の行動と生産性をどのように形作るかを探ります。 pHが細胞代謝と生存率に与える影響 pHレベルが最適範囲から逸脱すると、細胞はバランスを維持するためにより多くの労力を要します。例えば、Na⁺/H⁺アンチポーターのようなメカニズムを活性化し、成長に使われるはずのエネルギーを消費します。[3].このエネルギーの再配分は、遺伝子活動の大きな変化を引き起こす可能性があります。ある研究では、培地のpHを6.7に下げると、わずか24時間以内に2,000以上の遺伝子がその発現レベルを変化させました[3]. pHと代謝の相互作用は悪循環を生み出す可能性があります。高い解糖活性は乳酸を生成し、培地のpHを下げます。いくつかの高密度培養では、最大90%のグルコースが乳酸に変換され[2]、急速な酸性化を引き起こします。この酸性化は最終的にさらなる乳酸生成を停止させますが、細胞成長が著しく減少するという代償を伴います[5]. 酸性およびアルカリ性の極端な条件は有害です。pH 7.1未満の酸性条件が成長を妨げることは広く知られていますが、アルカリ性条件 - pH 7.7から9の範囲。0 - は、増殖を遅らせ、製品の収量を減少させることもあります[2][4]。ほとんどの哺乳類細胞にとって、重要な下限pHは6.6から6.8の間です。この範囲を超えると、細胞はアポトーシスやネクローシスのリスクが高まります[5]。 これらのpHによる代謝の混乱は、温度が細胞の挙動にさらに影響を与える役割を果たす舞台を設定します。 細胞増殖と分化に対する温度の影響 温度は代謝活動とガスの溶解度において重要な役割を果たします。ほとんどの培養において37°Cが標準ですが、わずかな偏差でも成長やタンパク質生産に影響を与える可能性があります[3][5]。2017年にウィーン工科大学で行われた研究がこの効果を示しました。研究者たちは、pHの不均一性をシミュレートするために10–12 m³の撹拌タンクバイオリアクターでCHO細胞を使用しました。指数増殖期におけるpH 9.0ゾーンへの一時的な曝露は、最大生存細胞密度と最終製品収率の両方を著しく低下させました[4]. 培養肉生産の分野では、温度管理は二重の目的を果たします。増殖期には、安定した37°Cを維持することで効率的な細胞増殖が確保されます。しかし、細胞の接着と剥離を制御することで、足場のない組織層を形成するための高度な温度応答システムが開発されています[6]....
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バイオリアクターにおける生細胞モニタリングのための分析方法
バイオリアクター内の生細胞のモニタリングは、培養肉の生産において重要です。 スケーリングには、細胞の健康状態と成長をリアルタイムで追跡するための正確なツールが必要です。この記事では、キャパシタンスセンサー、ラマン分光法、蛍光を含む主要な方法をレビューし、産業用途におけるそれらの強みと限界を強調します。 重要な洞察: キャパシタンスセンサー: 生存細胞密度を継続的に測定します。接着細胞に効果的ですが、細胞サイズの変化に敏感です。 ラマン分光法: グルコースや乳酸のような代謝物を追跡します。水性環境に理想的ですが、複雑なキャリブレーションが必要です。 蛍光: NADH/NADPH信号を介して代謝活動をモニターします。迅速ですが、培地の背景信号に影響されます。 課題: トリパンブルーのような従来のテストは破壊的で遅いです。高い細胞密度と複雑な培地は光学的方法に干渉します。 センサーの汚れと校正の必要性が効率を制限します。 適切な方法を選択するには、プロセスの要件、バイオリアクターの規模、および無菌性のニーズに依存します。大規模な操作では、複数の技術を組み合わせることで最良の結果が得られることがよくあります。 生細胞密度のための静電容量ベースのセンサー 誘電分光法の仕組み 静電容量センサー、または高周波インピーダンスセンサーとしても知られるこれらのセンサーは、生きた細胞を小さな球状のコンデンサーとして扱います。細胞の懸濁液に電場を加えると、培地中のイオンと細胞質内のイオンが動き始めます。最終的に非導電性の細胞膜に遭遇し、分極 - 膜を横切る電荷の分離を引き起こします[5][6]。ここでのポイントは、膜が無傷の細胞だけが分極できるということです。膜が無傷でない死んだ細胞はイオンを捕捉できず、したがってキャパシタンス信号に寄与しません[5][7]。Aber Instruments Ltd.の営業・マーケティングディレクターであるJohn Carvellはこれをよく説明しています: "高周波（RF）インピーダンス...は、哺乳類細胞培養における生細胞濃度を監視するための最も堅牢で信頼性の高い方法と一般的に見なされています。" [5] 誘電分光法は、さまざまな周波数にわたる細胞懸濁液の誘電特性（または誘電率）を測定することによってこれを拡張します。このプロセスは、電場周波数が上昇するにつれて細胞の分極能力がどのように低下するかを示すβ分散曲線を生成します[6]。単一周波数の読み取りは、しばしば細胞の数だけでなく、生存可能なバイオボリューム - 生きている細胞が占める総体積 - を反映します。大きな細胞は小さな細胞よりも自然に信号に多く寄与します[5][6]. これらの原理は、キャパシタンスセンサー技術の基盤を形成し、バイオリアクターシステムにおいて貴重なツールとなっています。 培養肉バイオリアクターにおけるキャパシタンスセンサーの使用...
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プロセス分析技術 (PAT) の実装方法
プロセス分析技術（PAT）は、製造プロセスにリアルタイムの品質監視を統合し、一貫性を向上させ、廃棄物を削減します。これは、pH、酸素、栄養素などの要因を正確に制御することが重要な培養肉の生産に特に有用です。PATは、インラインセンサー、ケモメトリックス、自動化システムを組み合わせて、規制基準を満たしながら製品の品質を確保します。 PATを実装するための重要なステップ: 重要なプロセスパラメータ（CPP）の特定: 温度、溶存酸素、pH、グルコースなどの要因に焦点を当てます。 監視ツールの選択: リアルタイムデータのためにインラインセンサー（e.g、ラマン分光法）を使用します。 PATシステムの統合: センサーをバイオリアクターに接続して自動フィードバック制御を行います。 予測モデルの開発: データ分析を使用してプロセスを最適化します。 コンプライアンスの確保: GMP、ISO 17025、その他の規制ガイドラインに従う。 Cellbaseのようなプラットフォームは、培養肉生産のための機器調達を簡素化し、業界のニーズに合わせたツールを提供します。PATを採用することで、効率を向上させ、コストを削減し、高い製品基準を維持できます。 培養肉生産におけるPAT導入のための5ステッププロセス バイオプロセス専門家パネルディスカッション I - PAT導入 重要プロセスパラメータ（CPP）の特定 培養肉生産の成功を確実にするためには、細胞の生存率、バイオマス収量、製品品質に影響を与える重要プロセスパラメータ（CPP）を特定することが不可欠です。これを誤管理すると、全生産が危険にさらされる可能性があります。監視すべき主要パラメータ 温度は重要な要素です。哺乳類の細胞は約37°Cで最適に成長し、魚類や昆虫の細胞は最適な代謝活動を維持するために、より低温の環境を必要とします[2]. 溶存酸素 (DO)は、好気性代謝にとってもう一つの重要な要素です。生産が拡大するにつれて、十分な酸素移動を確保することがより困難になります[2]。酸素が不足すると、細胞は嫌気性代謝に切り替わり、乳酸の蓄積を引き起こし、成長を妨げる可能性があります。 pHレベルは、培養の代謝状態を示す指標です。変動があると、酵素活性が妨げられ、細胞の健康が損なわれ、製品の特性（例えば、食感や保水性）に影響を与える可能性があります[2][3]。二酸化炭素 (CO₂) のレベルは、特に大規模な運用において慎重に管理する必要があります。動物細胞はCO₂レベルの上昇に特に敏感であり、継続的な監視が不可欠です [2]. グルコースと栄養素 は細胞の主なエネルギー源です。グルコースレベルが低すぎると、細胞が飢餓状態になり、死滅や早期分化を引き起こす可能性があります...
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コールドチェーンモニタリングのためのトップ5センサー
輸送中の正確な温度と湿度の維持は、培養肉にとって非常に重要です。小さな変動でも出荷品を台無しにし、廃棄につながる可能性があります。高度なIoTセンサーは、リアルタイムの監視を提供し、FSMAやEN12830のような厳しい規制に準拠しながら製品の完全性を確保します。以下は、コールドチェーンを保護するために設計された5つのトップセンサーです: Monnit ワイヤレス温度センサー: 高精度（±0.5°Cから±1°C）、長いバッテリー寿命（最大12年）、温度違反の即時アラートを提供します。価格は£144.00からです。 Monnit ワイヤレス湿度センサー: 0–100% RHを追跡し、600mのワイヤレス範囲と10年のバッテリー寿命を持ちます。湿気による損傷を防ぐのに理想的です。 SpotSee ColdChain Complete: 温度が限界を超えると色が変わる使い捨ての視覚インジケーター。コスト効率が高く、バッテリー不要です。 Sensitech 温度センサー: TempTale® デバイスを通じてリアルタイムデータとアラートを提供し、コンプライアンスを確保し、腐敗リスクを低減します。 Controlant IoTセンサー: 4G/5GおよびLoRaWANを使用して、継続的な監視と即時アラートを提供し、輸送中の安全な状態を確保します。 これらのセンサーは、廃棄物を削減し、品質を保護し、規制基準を満たすのに役立ちます。それぞれがコールドチェーン物流の課題に合わせた独自の利点を提供します。 トップ5 コールドチェーンモニタリングセンサー比較チャート Monnitのコールドチェーン用リモートモニタリングソリューション 1.Monnit ワイヤレス温度センサー Monnit ALTA ワイヤレス温度センサーは、2024年のIoTプロダクト・オブ・ザ・イヤー賞を受賞しました[7]。このセンサーは、培養肉の物流において画期的な存在であり、さまざまな温度ニーズに対応するモデルを提供しています。標準バージョンは–40°Cから125°Cの範囲で±1°Cの精度で動作し、低温モデルは–200°Cから0°Cをカバーし、さらに細かい±0.5°Cの精度を持っています[7][8]。 温度範囲と精度 厳格な基準に基づいて構築されたこのセンサーは、精度と信頼性を確保します。各ユニットには、NISTトレーサブルな校正証明書が付属しており、標準モデルは25ヶ月間、低温バリアントは13ヶ月間有効です[7][9]。これらの認証は、ヨーロッパのEN12830コールドチェーントレーサビリティ要件およびFDAの21...
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自動サンプリングシステムによるリアルタイムメディア分析
自動化サンプリングシステムは、特に培養肉の生産において、バイオプロセスの監視方法を変革しています。これらのシステムは、栄養素レベル、代謝物、細胞の健康状態などの重要な要素に関する頻繁で正確かつリアルタイムのデータを提供し、手動サンプリングでは実現できないものです。手動では1日1回のところを、2～3時間ごとに実行することで、代謝の変化をより明確に把握し、コストのかかる生産エラーを防ぐのに役立ちます。 主なポイントは以下の通りです: 効率性: サンプリング、分析、洗浄サイクルは15分以内で完了します。 無菌性: システムは370時間以上無菌状態を維持し、汚染リスクを低減します。 正確性: グルコース測定の誤差はわずか1.1%で、アミノ酸分析はほぼリアルタイムの洞察を提供します。 労働節約: 手動介入を最小限に抑え、スタッフが他の作業に専念できるようにします。 アプリケーション: 培養肉生産における一貫性とスケーラビリティを向上させます。 これらのシステムは、HPLCやラマン分光法のような高度なツールとシームレスに統合され、正確な栄養素のモニタリングとリアルタイムのプロセス調整を可能にします。その結果、より良い品質管理、変動の削減、より効率的な生産ワークフローをサポートします。 手動 vs 自動サンプリングシステム: バイオプロセスにおける性能比較 自動サンプリング技術に関する研究 研究方法とアプローチ 自動サンプリング技術の最近の進歩は、培養肉生産におけるその応用を大幅に洗練しました。これらの研究は、プロセス全体での無菌性を維持しながら、分析ツールと自動サンプリングシステムの統合に焦点を当てています。通常、研究者は自動サンプラーをHPLCやキャピラリー電気泳動のような確立された方法と組み合わせて、インラインセンサーでは正確に測定するのが難しい複雑な代謝物を監視します。 2020年5月、ウィーン工科大学のチームは、CHOフィードバッチ培養中にLucullus PIMSソフトウェアを利用して、NumeraシステムをSecurecell AGによって調査しました。彼らは18種類のアミノ酸とIgG製品レベルを監視し、連続運転370時間の間、驚異的な無菌状態を維持しました[2]。細胞密度が増加するにつれて、「プッシュアウト時間」などのシステム設定の調整が重要になりました[2]。 同様に、2017年8月、ロザンヌ・M。Guijtは、タスマニア大学から、逐次注入キャピラリー電気泳動（SI-CE）を用いて、Jurkat細胞の5つの並行懸濁培養をモニターしました。4日間にわたり、システムは各培養につき96のアッセイを実施し、各電気泳動分離にはわずか12分しかかかりませんでした。驚くべきことに、フラスコあたり5.78 mL（分析あたり60 µL未満）しか必要とせず、培養量を大幅に減らすことなくハイスループットスクリーニングに理想的です[6]。これらの正確で体系的な方法は、パフォーマンスデータへのより深い洞察の基盤を築きます。 研究結果とパフォーマンスデータ これらの研究から得られた発見は、自動サンプリングシステムの効率と精度を強調しています。例えば、ウィーンのチームは、グルコース測定で1.1%の相対標準偏差を達成しました。さらに、サンプル希釈によって引き起こされる系統的誤差が修正され、真の値からの偏差が0.1%から3%にまで低減されました[2]。この精度のレベルは、通常の手動サンプリングが提供するものよりもはるかに優れています。 サンプリング頻度も重要な利点です。手動サンプリングは通常1日1回に制限されますが、自動化システムは1日8回から24回サンプリングでき、見逃されがちな代謝変化を捉えることができます。ウィーンの研究では、アミノ酸分析がサンプル採取から45分遅れで完了し、栄養素の枯渇に関するほぼリアルタイムの洞察を提供しました[2]。タスマニアの研究は、もう一つの重要な利点を強調しました。リアルタイムの細胞密度測定に対して乳酸データを正規化することにより、研究者はロテノンやクリオキノールのような化合物の薬理効果を単純なバイオマスの変化から区別することができました[6]。このレベルの詳細さは、従来の手動サンプリングではほぼ達成不可能であり、まばらなデータポイントが重要な代謝パターンをしばしば隠してしまいます。 メディアモニタリングのためのセンサー技術...
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バイオリアクターのスケーリング: せん断応力モデリング技術
培養肉生産のためのバイオリアクターのスケーリングは複雑であり、特にスケールアップ中に哺乳類細胞を損傷する可能性のある機械的力であるせん断応力の管理が重要です。微生物細胞とは異なり、哺乳類細胞は壊れやすく、乱流やエアレーションの力に敏感です。せん断応力が3 Paを超えると、細胞が破裂し、細胞の生存率と生産性が低下します。 これらの課題に対処するために、エンジニアは計算流体力学 (CFD)とスケールダウンモデルに依存して、フルスケール生産前にせん断応力を予測し管理します。CFDはバイオリアクター内の流れのパターン、せん断ゾーン、混合効率を分析し、スケールダウンモデルはこれらの予測を実験的に検証し、スケールアップ時のリスクを最小限に抑えます。 重要なポイント: せん断応力の限界: 哺乳類細胞は3 Paまで耐えられます。これを超えると細胞が損傷します。 CFDツール: ラージ・エディ・シミュレーション（LES）やラティス・ボルツマン・シミュレーション（LB-LES）などの高度な手法により、流れと乱流の正確なモデリングが可能になります。 スケールダウンモデル: これらは、大規模なバイオリアクターの条件を小規模なセットアップで再現し、CFD予測を検証します。 設計上の考慮事項: 低せん断のためにピッチドブレードインペラーを使用します。 コルモゴロフ渦長を20μm以上に維持して、細胞の損傷を防ぎます。 インペラーチップ速度を1.5 m/s以下に保ちます。 CFDの洞察を実験的検証と組み合わせることで、チームは培養肉生産のためのバイオリアクターデザインを最適化し、細胞の生存と効率的なスケーリングを確保できます。CFDコンパス | バイオリアクターCFDのベストプラクティス 計算流体力学（CFD）を使用したせん断応力のモデル化 培養肉生産における異なるバイオリアクタータイプのためのCFDアプローチと主要パラメータ CFDシミュレーションは、エンジニアに物理的に構築される前にバイオリアクター内の流体力学とせん断力をマッピングするツールを提供します。生産規模での試行錯誤の方法に頼る代わりに、CFDは特定の容器の部分での高せん断ゾーン、乱流渦、細胞の生存率などの重要な要因を予測するのに役立ちます。これは、バイオリアクターの規模が最終的に200,000リットルに達する可能性がある培養肉生産において特に重要です - これは従来のバイオ医薬品容器よりもはるかに大きいです[8]。これらの予測的洞察は、スケールダウン実験を導き、機器の選択に影響を与えます。計算技術の進化は著しいものがあります。k-εのようなレイノルズ平均ナビエ・ストークス（RANS）モデルは業界で広く使用されていますが、ラージ・エディ・シミュレーション（LES）やGPUを活用したラティス・ボルツマンシミュレーション（LB-LES）のような先進的な手法が限界を押し広げています。プラハ化学技術大学のミロスラフ・スース教授によれば、GPUベースのLB-LESは「一般的に使用される有限体積法ソルバーよりも100倍から1,000倍速くモデルを解くことができる」[2]とのことです。この速度の利点により、エンジニアは細胞に損傷を与える渦を検出するために必要な精度で大規模な容器をシミュレートすることができます。 CFDの能力の実用的な例として、Regeneron Ireland DACとThermo Fisher Scientificの研究者が挙げられます。彼らは、2,000リットルのバイオリアクターから幾何学的に異なる5,000リットルのシングルユースバイオリアクターへの細胞培養プロセスのスケールアップに成功しました。...
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培養肉のためのトップ7除染ツール
培養肉の生産において、汚染は大きな障害となっており、バッチの失敗率は11.2%に達し、大規模な運用では19.5%にまで上昇しています。これにより、成長培地（生産コストの50%以上）などのリソースが無駄になり、スケジュールが乱れます。効果的な除染はこれらのリスクを最小限に抑えるための鍵です。培養肉施設での無菌状態を維持するために使用される主要なツールの概要を以下に示します: 工業用洗剤および脱脂剤: 脂肪やタンパク質などの有機残留物を除去し、事前消毒のための清掃に不可欠です。 食品用消毒剤: 清掃後の微生物負荷を減少させ、細菌やバイオフィルムを対象とします。 定置洗浄（CIP）システム: バイオリアクターや配管の内部洗浄を分解せずに自動化します。 UV除染ランプ: UV-C光を使用して、化学薬品を使わずに表面や空気を消毒します。 過酸化水素蒸気発生器: 部屋や機器の徹底的で非接触の滅菌を提供します。 ステンレススチール消毒ワードローブ: ツール、PPE、小型機器を制御された環境で消毒します。 自動センサークリーニングステーション: バイオリアクタープローブを清潔で機能的に保ち、正確なモニタリングを維持します。 各ツールは、表面の清掃から機器の滅菌、バイオセーフティ基準の維持まで、特定の汚染課題に対応します。これらの方法を組み合わせることで、より安全で効率的な生産を実現し、コストのかかる失敗を減らします。以下では、各ツールの動作と培養肉生産における実用的な応用について詳しく説明します。 培養肉生産のための7つの除染ツールの比較 1.工業用洗剤と脱脂剤 工業用洗剤と脱脂剤は、培養肉生産施設の清潔さを維持する上で重要な役割を果たします。これらの強力な洗浄剤は、製造中に表面や機器に蓄積する脂肪、タンパク質、細胞の破片などの有機残留物を物理的に除去するように設計されています。この重要な洗浄ステップを省略すると、消毒の努力が損なわれる可能性があり、残留する有機物が消毒剤から細菌を保護することがあります。 初期の洗浄後、全体的な除染プロセスを改善するために特定のアプリケーションが使用されます。 主な用途 pH範囲が10.5〜11.5のアルカリ性洗剤（少なくとも200 ppmの活性アルカリ性と200 ppmの塩素を含む）は、有機汚れを分解するのに非常に効果的です。一方、酸性化合物は、機器の隙間に詰まった鉱物堆積物を除去するために使用されます[7]。 垂直面には、高発泡の塩素系クリーナーが好まれます。通常15分の接触時間が確保され、徹底的な清掃が可能です[6]. 除染方法 清掃は、温水（<48.9°C）で表面をすすぐことから始まり、バイオフィルムを破壊するために手動で擦ります。定置洗浄（CIP）システムには、ポンプのキャビテーションなどの問題を避けるために低発泡の苛性クリーナーが推奨されます[5][8]。洗剤を適用した後は、飲料水で完全にすすぐことが不可欠です。このステップは非常に重要です。なぜなら、ほとんどの洗剤はアルカリ性であり、多くの消毒剤は酸性であるため、残留洗剤が消毒剤を中和し、効果を失わせる可能性があるからです[8]. 培養肉機器との互換性 材料の互換性も重要な考慮事項です。塩素系製品は、バイオリアクターのシールやチューブに見られるゴムやシリコン部品に早期の摩耗や損傷を引き起こす可能性があります[7]。バイオリアクターフィルター、ヒュームフード、316グレードのステンレス鋼タンクのような繊細な機器には、敏感な表面を損なうことなく硬化したグリースを除去するために、特殊な脱脂剤が使用されます[4]。泡立たないアルカリ性脱脂剤は、工業用スクラバーマシンを使用して床や壁などの広いエリアを徹底的に清掃するのにも理想的です[4]。 利点と制限...
