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Wege der Biotechnik für gesündere Fettprofile in kultiviertem Fleisch

Pathway Engineering for Healthier Fat Profiles in Cultivated Meat

David Bell |

Kultiviertes Fleisch verändert unsere Denkweise über die Lebensmittelproduktion, indem es den Geschmack und die Textur von herkömmlichem Fleisch bietet, ohne die gleichen Gesundheitsbedenken. Ein wesentlicher Schwerpunkt liegt auf der Verbesserung der Fettzusammensetzung, um sie gesünder zu machen.

Das müssen Sie wissen:

  • Gesündere Fette wie einfach ungesättigte und Omega-3-Fettsäuren werden gegenüber gesättigten Fetten priorisiert, die mit kardiovaskulären Risiken in Verbindung gebracht werden.
  • Pathway-Engineering verwendet metabolische und genetische Techniken, um die Fettproduktion auf zellulärer Ebene zu beeinflussen.
  • Methoden umfassen:
    • CRISPR-Cas9-Genbearbeitung , um die Produktion gesättigter Fette zu reduzieren.
    • Enzymüberexpression ( e.g. , Stearoyl-CoA-Desaturase), um einfach ungesättigte Fette zu erhöhen.
    • Wachstumsmedien-Supplementierung, um den Omega-3-Gehalt ohne genetische Modifikation zu steigern.
  • Herausforderungen umfassen die Skalierung der Produktion und die Aufrechterhaltung des Geschmacks bei gleichzeitiger Verbesserung des Nährwerts.

Dieser Ansatz hilft Produzenten von kultiviertem Fleisch, Produkte zu schaffen, die gesünder und besser an moderne Ernährungsbedürfnisse angepasst sind.

Entwicklung von Zelllinien für kultiviertes Fleisch und nachhaltige zelluläre Landwirtschaft #culturedmeat

Wie die Fettsäuresynthese bei kultiviertem Fleisch funktioniert

Die Fettsäuresynthese spielt eine Schlüsselrolle bei der Gestaltung des Fettgehalts von kultiviertem Fleisch, insbesondere wenn es darum geht, den Gehalt an gesättigten Fettsäuren zu reduzieren. Durch das Management der Fettzusammensetzung auf zellulärer Ebene können Wissenschaftler beeinflussen, ob das resultierende Fleisch gesättigte, einfach ungesättigte oder mehrfach ungesättigte Fette enthält. Dies wird durch drei miteinander verbundene Stoffwechselwege erreicht, die jeweils zum Fettprofil beitragen. Lassen Sie uns diese aufschlüsseln.

Der Fettsäuresynthase-Weg

Der Prozess beginnt mit dem Fettsäuresynthase (FAS) Weg, der für die Produktion gesättigter Fette verantwortlich ist. Im Zentrum dieses Weges steht das Enzym Acetyl-CoA-Carboxylase (ACC), das den ersten Schritt der Fettsäuresynthese im Zytoplasma katalysiert. Dieses Enzym dient auch als Marker für reife Adipozyten - Zellen, die in der Produktion von kultiviertem Fleisch entscheidend sind [5].

Interessanterweise kann die Art und Weise, wie Zellen Fettsäuren produzieren, je nach Spezies variieren. Zum Beispiel neigen Rinderzellen dazu, Acetat zu verwenden, während menschliche Zellen mehr auf Glukose für die Fettsäuresynthese angewiesen sind [1]. Diese Unterschiede unterstreichen die Bedeutung der Anpassung des Weges an spezifische Bedürfnisse.

Desaturase-Enzyme und einfach ungesättigte Fette

Sobald gesättigte Fette synthetisiert sind, treten Desaturase-Enzyme in Aktion, um sie in einfach ungesättigte Fettsäuren (MUFAs) umzuwandeln, die als gesünder gelten. Zum Beispiel können diese Enzyme gesättigte Fette wie Palmitinsäure oder Stearinsäure in Ölsäure (C18:1) umwandeln, ein Fett, das häufig mit den gesundheitlichen Vorteilen von Olivenöl in Verbindung gebracht wird [5] .

Kultiviertes Fett, das aus fibro-adipogenen Vorläuferzellen gewonnen wird, neigt dazu, höhere Gehalte an Ölsäure und niedrigere Gehalte an Palmitinsäure im Vergleich zu herkömmlichem Rindertalg zu haben [5]. Diese Verschiebung in der Zusammensetzung kann durch Kulturbedingungen weiter beeinflusst werden. Zum Beispiel hat sich gezeigt, dass die Verwendung von serumfreien Mediumformulierungen die Triglyceridakkumulation in bovinen Fettstammzellen um 66 % im Vergleich zu traditionellen serumhaltigen Medien erhöht [1] .

Über MUFAs hinaus zielen weitere Anpassungen auf mehrfach ungesättigte Fette ab, um das Nährwertprofil zu verbessern.

Wege der mehrfach ungesättigten Fettsäuren

Mehrfach ungesättigte Fettsäuren (PUFAs), wie Omega-3- und Omega-6-Fettsäuren bieten eine Möglichkeit, den Nährwert von kultiviertem Fleisch zu verbessern. Diese essentiellen Fette, einschließlich Linolsäure, werden vom menschlichen Körper nicht produziert und müssen über die Nahrung aufgenommen werden.

Allerdings hat kultiviertes Fleisch oft niedrigere PUFA-Werte als herkömmliches Fleisch [5]. Um dies zu beheben, konzentrieren sich Forscher auf die Expression von Genen, die an der Triglyceridsynthese beteiligt sind, wie PPARγ, Gpd1 und FABP4 [6][1]. Durch die Zielsetzung dieser Wege kann der PUFA-Gehalt erhöht werden, wodurch das Fleisch nahrhafter wird.

Zusätzlich kann die Zusammensetzung der PUFAs durch Medienergänzung. fein abgestimmt werden.Durch das Hinzufügen spezifischer Lipide zum Wachstumsmedium können Wissenschaftler entweder das Fettprofil von natürlichem tierischem Gewebe nachbilden oder ein Produkt mit verbesserten Nährwerten schaffen, alles ohne genetische Modifikation [3].

Weg/Enzym Primäre Funktion Auswirkung auf die Fettzusammensetzung
Fettsäuresynthase (FAS) Produziert langkettige gesättigte Fettsäuren Erhöht den Gehalt an gesättigten Fetten (e.g. , Palmitinsäure)
Acetyl-CoA-Carboxylase (ACC) Geschwindigkeitsbestimmender Schritt in der Fettsäuresynthese Wesentlich für das gesamte Lipidakkumulationsniveau
Desaturase-Enzyme Wandelt gesättigte Bindungen in Doppelbindungen um Erhöht einfach ungesättigte Fette (MUFAs) wie Ölsäure
PPARγ-Signalgebung Reguliert die adipogene Genexpression Kontrolliert die Reifung und das Volumen der Lipidspeicherung

Genetische und metabolische Ingenieurmethoden für verbesserte Fettprofile

Das Verständnis, wie Fettsäuren synthetisiert werden, hat Möglichkeiten eröffnet, die Fettzusammensetzung in kultiviertem Fleisch durch genetische und metabolische Ingenieurtechniken zu verfeinern.Diese Ansätze zielen darauf ab, den Gehalt an gesättigten Fettsäuren zu senken und gleichzeitig gesündere Fettsäuren zu fördern, um das Nährwertprofil an moderne Ernährungspräferenzen anzupassen.

CRISPR-Cas9 für gezielte Genbearbeitung

Die CRISPR-Cas9-Technologie ermöglicht es Wissenschaftlern, die Fettzusammensetzung durch präzise DNA-Bearbeitung anzupassen. Diese Methode kann Gene anvisieren und deaktivieren, die für die Produktion gesättigter Fette verantwortlich sind, ohne fremde DNA von anderen Spezies einzuführen [7].

"CRISPR ist ein Genbearbeitungswerkzeug, das wir uns als eine Art molekulare Schere vorstellen können. Wir können diese Schere nehmen und sie zu einem bestimmten Ort im Genom führen, um einen präzisen Schnitt in der DNA zu machen." - Dawn Cayabyab, Ph.D. Student, UC Davis [7]

Im Juni 2025 demonstrierten Forscher der Nanjing Agricultural University, einschließlich Shijie Ding, Chunbao Li und Guanghong Zhou, das Potenzial von CRISPR/Cas9 in der Produktion von kultiviertem Fleisch. Durch das Ausschalten des CDKN2A-Gens in porcinen Satellitenzellen adressierten sie die Zellalterung und schufen eine erneuerbare Quelle von Muskelvorläuferzellen. Diese modifizierten Zellen behielten über 18 Passagen hinweg ein stabiles Wachstum mit mehr als 90% Lebensfähigkeit bei. Mit 3D-essbaren Gerüsten, entwickelte das Team erfolgreich fleischähnliche Konstrukte und zeigte die Skalierbarkeit und genetische Optimierungsmöglichkeiten mit CRISPR [8].

Dieses präzise Bearbeitungswerkzeug ermöglicht es Forschern, direkt Zellen mit niedrigeren gesättigten Fettwerten auszuwählen. Darüber hinaus bietet die Modifikation der Enzymexpression einen weiteren Weg zur Verfeinerung der Fettprofile.

Überexpression von Stearoyl-CoA-Desaturase (SCD)

Eine weitere Methode zur Verbesserung der Fettzusammensetzung besteht darin, die Aktivität der Stearoyl-CoA-Desaturase (SCD) zu steigern. Dieses Enzym wandelt gesättigte Fettsäuren, wie Stearinsäure, in einfach ungesättigte Fettsäuren, wie Ölsäure, um [2]. Durch die Erhöhung der SCD-Expression kann das Lipidprofil in Richtung einfach ungesättigter Fette verschoben werden, die allgemein als gesünder gelten.

Dieser Ansatz funktioniert besonders gut in Kombination mit serumfreien Mediensystemen. Studien haben gezeigt, dass diese Systeme die Triglyceridanreicherung um 66 % im Vergleich zu traditionellen serumhaltigen Medien erhöhen können [9]. Das Ergebnis ist kultiviertes Fleisch mit einer gesünderen Fettzusammensetzung, die den Ernährungsrichtlinien entspricht.

Wachstumsmedien-Supplementierung zur Anreicherung mit Omega-3

Über genetische Modifikationen hinaus kann die Anpassung des Wachstumsmediums die Fettsäureprofile weiter verbessern. Zum Beispiel erhöht die Supplementierung des Kulturmediums mit ungesättigten Fettsäuren wie Linolensäure die intrazellulären Lipidspiegel, ohne die Zellviabilität zu beeinträchtigen [4].

Eine sorgfältig gestaltete Mischung von Fettsäuren kann das Fettprofil von natürlichem Rindfleisch nachbilden. Diese Methode unterstützt die Gesamtlipidkonzentrationen bis zu 400 µM im Medium - weit über der toxischen Schwelle für gesättigte Fette wie Palmitinsäure. Ungesättigte Fettsäuren, wie Linolensäure, werden von Zellen besser toleriert, mit nicht-toxischen Konzentrationen bis zu 200 µM, verglichen mit der Toxizität von Palmitinsäure bei etwa 40 µM [4].

"Die Einbeziehung gesundheitsfördernder Fettsäuren, wie n-3 mehrfach ungesättigte Fettsäuren (PUFAs), stellt eine potenzielle Strategie dar, um den Nährwert dieser Produkte zu verbessern." - Waris Mehmood et al., Aarhus University [4]

In Kombination mit Biomaterialien für 3D-Kultursysteme, wie Spheroide, wird die Medienergänzung noch wirkungsvoller. Diese Kombination hat gezeigt, dass sie die Triglyceridanreicherung um bis zu 34 % im Vergleich zu 2D-Monolayer-Kulturen erhöht [9]. Allerdings müssen Omega-3-Werte sorgfältig verwaltet werden, um "fischartige" Geschmacksrichtungen im Endprodukt zu vermeiden [4].

Vergleich verschiedener Ansätze der Stoffwechselweg-Optimierung

Pathway Engineering Methods for Healthier Fat Profiles in Cultivated Meat

Methoden der Stoffwechselweg-Optimierung für gesündere Fettprofile in kultiviertem Fleisch

Dieser Abschnitt beleuchtet die Stärken und Kompromisse verschiedener Methoden der Stoffwechselweg-Optimierung, basierend auf den zuvor diskutierten Techniken. Jeder Ansatz bietet einzigartige Vorteile zur Verbesserung der Fettprofile in kultiviertem Fleisch, und die Wahl hängt weitgehend von Produktionszielen, technischen Ressourcen und Ernährungszielen ab.

Beginnen wir mit CRISPR-basierten Gen-Knockouts. Diese erzeugen dauerhafte genetische Veränderungen, was sie nach der Implementierung hoch skalierbar macht. Sie bringen jedoch Herausforderungen mit sich, darunter strenge regulatorische Anforderungen und die Notwendigkeit fortgeschrittener technischer Expertise. Andererseits bietet die Überexpression von Desaturase, insbesondere unter Einbeziehung des SCD-Enzyms, einen Ausgleich.Diese Methode etabliert stabile Zelllinien, die kontinuierlich gesättigte Fette in gesündere einfach ungesättigte Fette (MUFAs) umwandeln, wodurch der Bedarf an laufenden externen Eingaben entfällt.

Dann gibt es die Medienergänzung, die sich durch ihre Einfachheit und schnelle Anwendung auszeichnet. Eine Studie aus dem Jahr 2026 zeigte ihre Wirksamkeit: Die Verwendung von Olivenöl und Sojalecithin als lipogene Induktoren reduzierte gesättigte Fettsäuren in kultiviertem Schweinefleisch von 51,2 % auf 44,49 %, während mehrfach ungesättigte Fettsäuren von 27,01 % auf 31,33 % erhöht wurden [10]. Obwohl einfach und effektiv, sind mit der Medienergänzung wiederkehrende Kosten verbunden, die eine sorgfältige Finanzplanung erfordern. In Kombination mit fortschrittlichen 3D-Sphäroid-Systemen, kann diese Methode die Triglyceridakkumulation weiter steigern.

Methode Vergleichstabelle

Methode Reduzierung gesättigter Fette Skalierbarkeit Sinneseigenschaften Technische Anforderungen
CRISPR Knockouts Hoch (gezielte Entfernung) Hoch (dauerhafte Veränderung) Variabel; kann Geschmacksanpassungen erfordern Hohe technische Expertise; regulatorische Hürden
Desaturase-Überexpression Hoch (Umwandlung in MUFAs) Hoch (stabile Integration) Verbessert "fleischigen" Geschmack und Schmelzeigenschaften Mittel bis hoch; beinhaltet virale Vektoren oder Integration
Medienergänzung Mittel bis hoch (aufnahmebasiert) Sehr hoch (keine genetischen Veränderungen)Excellent; verfeinert Geschmack und Aroma Niedrige technische Anforderungen; höhere laufende Kosten

Aus diesem Vergleich wird deutlich, dass die besten Ergebnisse oft durch die Kombination von Methoden erzielt werden.Zum Beispiel wurde gezeigt, dass die Kombination von serumfreien Medien mit 3D-Sphäroidkultur die Triglyceridanreicherung um 66 % bzw. 34 % im Vergleich zu traditionellen Techniken erhöht [9]. Dieser geschichtete Ansatz ermöglicht es Forschern, sowohl genetische als auch Umweltfaktoren zu verfeinern, um kultiviertes Fleisch mit optimierten Fettprofilen zu schaffen, die den Verbrauchern gefallen und Gesundheitsstandards erfüllen.

Ausrüstung und Materialien für das Pathway Engineering

Die Schaffung gesünderer Fettprofile in kultiviertem Fleisch erfordert spezialisierte Werkzeuge und biologische Materialien, die normalerweise nicht von allgemeinen Lieferanten erhältlich sind. Dieses Feld hat ein signifikantes Wachstum erfahren, mit über 140 Unternehmen, die bis 2025 voraussichtlich mehr als 2,7 Milliarden £ investieren werden [12].

Wichtige Ressourcen für diese Arbeit umfassen:

  • Zelllinien: Beispiele umfassen porcine adipose stem cells, bovine myosatellite cells, and water buffalo adipose cells [11].
  • Serumfreie Medienformulierungen: Wesentlich für die skalierbare Produktion [4].
  • Fettsäuren: Wie Ölsäure, Linolsäure, Linolensäure, Stearinsäure und Palmitinsäure zur Feinabstimmung von Fettprofilen [4].
  • Bioreaktoren: Optionen umfassen Rührkessel, Airlift, Festbett- oder Perfusionssysteme [12].
  • 3D-Sphäroid-Kultursysteme: Verwendet für verbesserte Zellreifung [12].
  • Analytische Werkzeuge: Einschließlich RT-qPCR, Durchflusszytometrie und hochauflösende Bildgebungssysteme wie das Agilent BioTek Cytation 5 [4].

Finden von Geräten und Materialien auf Cellbase

Cellbase

Für Forscher im Bereich kultiviertes Fleisch kann die Beschaffung dieser spezialisierten Materialien über Cellbase vereinfacht werden. Diese Plattform verbindet Wissenschaftler mit verifizierten Lieferanten und kategorisiert Produkte speziell für die Bedürfnisse des Weg-Engineerings - einschließlich Zelllinien, Wachstumsmedien, Gerüste, Bioreaktoren, Metabolitsensoren und Geräte für die nachgelagerte Verarbeitung [12].

Cellbase vereinfacht die Beschaffung mit branchenspezifischen Filtern, wie z.B. GVO-Status, Biosicherheitsstufen, regulatorische Konformität, Maßstabskompatibilität und Spezies [11]. Zum Beispiel können Benutzer bei der Auswahl von Zelllinien für Studien zur Lipidakkumulation Filter wie "Adipose Stem Cell" und "GMO-Status" anwenden, um schnell geeignete Optionen einzugrenzen [11].

Empfindliche biologische Materialien, wie primäre Zelllinien und Wachstumsfaktoren, werden mit Kühlkettenlogistik gehandhabt, um die Lebensfähigkeit während des Versands zu erhalten. Darüber hinaus können Forscher "Cell Ag Experts" auf Cellbase für technische Beratung konsultieren, insbesondere beim Übergang von laborbasierten Geräten zu Produktionsmaßstab-Bioreaktoren. Die "Ask us anything"-Funktion der Plattform bietet wertvolle Unterstützung während dieses Übergangs [12]. Diese Werkzeuge und Dienstleistungen machen die Beschaffung schneller und reduzieren die Risiken, die mit der Navigation durch mehrere allgemeine Lieferanten verbunden sind.

Einrichtung eines Pathway-Engineering-Workflows

Die Einrichtung eines effizienten Pathway-Engineering-Workflows erfordert sorgfältige Beachtung der Materialkompatibilität und der Prozesskontrolle. Zum Beispiel müssen Gerüste 37°C Kulturbedingungen, Sterilisation und Kochprozesse aushalten [12]. Echtzeitsensoren für Glukose-, Laktat- und Ammoniumwerte sind entscheidend für die Aufrechterhaltung einer präzisen Stoffwechselkontrolle [12].

Cellbase verbessert auch das Beschaffungserlebnis mit transparenter Preisgestaltung, schnellem Checkout und weltweitem Versand, um sicherzustellen, dass Forscher weltweit Zugang zu wichtigen Materialien haben [12] . Für Teams, die auf serumfreie Medien umsteigen - ein entscheidender Schritt zur Skalierung der nachhaltigen Produktion von kultiviertem Fleisch - bietet die Plattform verifizierte Materialien zur Unterstützung dieses Wechsels [12]. Durch die Nutzung eines spezialisierten Marktplatzes wie Cellbase können Forscher technische Risiken reduzieren und Beschaffungsentscheidungen effizienter treffen, als wenn sie sich auf mehrere allgemeine Lieferanten verlassen.

Schlussfolgerung und zukünftige Richtungen

Die Weg-Engineering hat spannende Möglichkeiten eröffnet, Fettprofile in kultiviertem Fleisch fein abzustimmen. Durch den Einsatz von Techniken wie Optimierung von serumfreien Medien und fortschrittlichen 3D-Kultursystemen können Forscher nun ein Maß an ernährungsphysiologischer Präzision erreichen, das die traditionelle Viehzucht einfach nicht replizieren kann.

Einige der vielversprechendsten Durchbrüche resultieren aus der Kombination mehrerer Strategien. Zum Beispiel zeigt die FaTTy-Schweinezelllinie, wie verbesserte MUFA-Profile ohne den Bedarf an Genbearbeitung erreicht werden können [2]. Ähnlich zeigte Martin Krøyer Rasmussen von der Universität Aarhus im Dezember 2025, dass die Exposition differenzierter Rindersatellitenzellen gegenüber einer sorgfältig ausgewogenen Fettsäuremischung bei 400 µM zur höchsten Lipidtröpfchenakkumulation führte, während die Zellviabilität erhalten blieb [4] .

Allerdings bleiben Herausforderungen bestehen, insbesondere wenn es um die Skalierung der Produktion geht. In 3D-Kulturen können Massentransportbegrenzungen - wie Sauerstoff- und Nährstoffgradienten - zum Zelltod in dichten Gewebekernen führen [1]. Eine praktische Lösung liegt in der zweistufigen Bioprozessierung, die Hochdichte-Bioreaktoren für die Zellexpansion verwendet, gefolgt von spezialisierten 3D-Differenzierungsphasen [1]. Zusätzlich zeigt die Anreicherung von Produkten mit Omega-3-Fettsäuren vielversprechende Ergebnisse, jedoch ist eine sorgfältige Kalibrierung erforderlich, um das Risiko von fischartigen Off-Flavours bei höheren Konzentrationen zu vermeiden [4].

Der Wechsel zu serumfreien Medien ist ein weiterer kritischer Fortschrittsbereich. Über die ethischen und ökologischen Vorteile hinaus erweisen sich serumfreie Formulierungen als effektiv bei der Verbesserung sowohl der Zellproliferation als auch der Lipidanreicherung [1]. Diese Fortschritte verändern die Art und Weise, wie kultiviertes Fleisch produziert wird.

Letztendlich hängt der Erfolg in diesem Bereich davon ab, die richtige Kombination von Zelltypen, Kultursystemen und Medienformulierungen auszuwählen, um spezifische Produktziele zu erreichen.Ob das Ziel darin besteht, den Gehalt an gesättigten Fettsäuren zu senken, den Omega-3-Gehalt zu erhöhen oder eine realistische Marmorierung zu schaffen, die hier beschriebenen Wege der Pathway-Engineering-Strategien bieten eine starke Grundlage für die Entwicklung der nächsten Generation von ernährungsphysiologisch optimiertem kultiviertem Fleisch. Diese Entwicklungen signalisieren eine gesündere, kommerziell tragfähigere Zukunft für die kultivierte Fleischindustrie.

FAQs

Welche Methode des Pathway-Engineering reduziert am besten gesättigte Fette in kultiviertem Fleisch?

Eine effektive Möglichkeit, gesättigte Fette in kultiviertem Fleisch zu reduzieren, ist die Verwendung von serumfreien Medien. Diese Technik optimiert die Lipidakkumulation in Muskel-Satellitenzellen und ermöglicht eine bessere Kontrolle über die Fettsäureprofile. Dadurch wird der Gehalt an gesättigten Fettsäuren im Endprodukt verringert. Diese Fortschritte spielen eine Schlüsselrolle bei der Schaffung gesünderer Fettprofile für kultiviertes Fleisch.

Wie können Omega-3-Werte erhöht werden, ohne die DNA der Zellen zu verändern?

Die Zugabe von aus Mikroalgen gewonnenen Omega-3-Fettsäuren zum Kulturmedium kann die Omega-3-Werte in kultiviertem Fleisch erhöhen. Diese Methode verbessert das Nährwertprofil, ohne die DNA der Zellen zu verändern.

Werden gesündere Fettprofile den Geschmack, das Aroma oder das Mundgefühl von kultiviertem Fleisch beeinflussen?

Es wird erwartet, dass gesündere Fettprofile den Geschmack, das Aroma und die Textur von kultiviertem Fleisch beeinflussen. Fett spielt eine Schlüsselrolle bei der Gestaltung dieser sensorischen Eigenschaften. Die gute Nachricht? Kultiviertes Fett hat bereits gezeigt, dass es traditionelles Fett sowohl in seiner chemischen Zusammensetzung als auch in seinen sensorischen Eigenschaften eng nachahmen kann. Das bedeutet, dass es ein Gleichgewicht zwischen gesundheitlichen Vorteilen und dem Erhalt des beliebten Geschmacks bietet.

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Author David Bell

About the Author

David Bell is the founder of Cultigen Group (parent of Cellbase) and contributing author on all the latest news. With over 25 years in business, founding & exiting several technology startups, he started Cultigen Group in anticipation of the coming regulatory approvals needed for this industry to blossom.

David has been a vegan since 2012 and so finds the space fascinating and fitting to be involved in... "It's exciting to envisage a future in which anyone can eat meat, whilst maintaining the morals around animal cruelty which first shifted my focus all those years ago"